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步琦實驗室設(shè)備貿(mào)易（上海）有限公司
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同一系統(tǒng)上使用
Flash和制備HPLC色譜純化多肽
色譜應(yīng)用
”
1
簡介
固相多肽合成（SPPS）是科學(xué)研究、臨床和商業(yè)合成領(lǐng)域中最常用的多肽合成路徑。由于反應(yīng)通常產(chǎn)生多種長度的肽鏈，所以這些反應(yīng)混合物的提純非常具有挑戰(zhàn)性。使用大孔反相填料色譜柱和制備 HPLC 能夠得到高純度的結(jié)果，所以常用于此類純化。不過，多肽反應(yīng)通常很復(fù)雜，含有很多雜質(zhì)。將此樣品引入昂貴的制備 HPLC 柱和系統(tǒng)中會產(chǎn)生額外的消耗，而且需要較多時間進(jìn)行樣品純化。Pure Prep 系統(tǒng)既能運(yùn)行制備 HPLC 也能運(yùn)行 Flash 色譜模式，令您從容選擇使用制備 HPLC 還是更經(jīng)濟(jì)的 Flash 色譜。FlashPure 大孔 Flash 柱填裝高效的 20μm 粒徑的填料，分離度高，這是分離很靠近的化合物分子諸如多肽等特別需要的。在此我們證明，如何在同一系統(tǒng)上使用 FlashPure Flash 柱和 HPLC 柱純化復(fù)雜的多肽反應(yīng)物，并使最終純度超過95%。
2
實驗材料和方法
樣品 | 樣品1（Flash色譜） | 樣品2（制備HPLC） |
多肽混合物 | 25mg 反應(yīng)混合物 | 15mg 反應(yīng)混合物 |
目標(biāo)多肽鏈長 | 20 個氨基酸 | 15 個氨基酸 |
多肽序列 | CQQYNRPYXXXGGTKLEIKR-NH2 | CAKHYYYGGXXXMDY-NH2 |
純化 | Flash 色譜 | Prep 色譜 |
儀器系統(tǒng) | Pure flash 模式 | Pure Prep 模式 |
Flash 柱芯/色譜柱 | FlashPure WP C18 12g | Vydac 150HC，22×150mm，10um |
梯度/檢測器 | A=水 B=乙腈+0.1%TFA | A=水 B=乙腈+0.1%TFA |
進(jìn)樣模式 | 液體進(jìn)樣 | 液體進(jìn)樣 |
分析 | 分析型 HPLC |
系統(tǒng) | Agilent 1200 |
色譜柱 | Kromasil C18 100×4.6mm，3um |
流動相 | A=水+0.1%TFA B=20%水，80%乙腈+0.1%TFA |
梯度 | 樣品1：20分鐘內(nèi)10-50%B 樣品2：20分鐘內(nèi)15-55%B |
檢測波長 | UV214nm |
進(jìn)樣模式 | 液體進(jìn)樣-多種進(jìn)樣體積 |
3
結(jié)果與討論
純度結(jié)果 | 純化前純度 | 純化后純度 |
樣品1（Flash 色譜純化） | 58.5% | 95% |
樣品2（Prep 色譜純化） | 55.9% | 98.9% |
4
結(jié)論
通過以上實驗證明：使用反相 Flash 柱和 HPLC 色譜柱，成功地在同一系統(tǒng)上進(jìn)行了多肽純化，得到純度超過 95% 的餾分。高效大孔 Flash 色譜填料提供了堪比制備 HPLC 色譜柱水平的純度，Pure Prep 系統(tǒng)既能夠運(yùn)行制備 HPLC 也能運(yùn)行 Flash 色譜模式，您可以自如選擇使用制備 HPLC 或更經(jīng)濟(jì)的一次性 Flash 色譜柱。
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