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微量化的P450代謝檢測

微量化的P450代謝檢測
貝克曼庫爾特生命科學  2024-08-23  |  閱讀:966

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藥物代謝實驗中,細胞色素P450(Cytochrome P450 Proteins, CYP)檢測是最常用的實驗之一,了解P450的代謝情況,可以幫助了解藥物在細胞以及動物體內(nèi)的代謝情況,是藥物開發(fā)中常用的實驗方法。


傳統(tǒng)的檢測方法反應(yīng)體積大,步驟多,很難進行快速高效的實驗,現(xiàn)在我們可以使用Echo納升移液的方法,將化合物體積縮小100倍,試劑體積減小5倍,檢測板可以使用384或者1536孔板進行,來提高整個實驗的效率和質(zhì)量。


下圖是利用P450-Glo? Screening Systems試劑盒,進行發(fā)光法的P450檢測結(jié)果,實驗中


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  • 化合物使用50nL

  • Luciferin檢測試劑5uL

  • 酶和底物以及NADPH試劑4.95uL

  • 用酶標儀檢測

  • 利用Echo直接稀釋獲得24點的濃度反應(yīng)曲線


另外還可以進行小體積的MS檢測,如下圖,左側(cè)為實驗流程以及反應(yīng)體積,右側(cè)是實驗結(jié)果:


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使用Echo聲波納升移液可以為我們帶來:


  • 精準的移液質(zhì)量

  • 快速的移液過程

  • 減少100倍的化合物體積

  • 更少的實驗步驟

  • 容易實現(xiàn)的聯(lián)合用藥檢測

  • 無耗材的實驗方法


以上實驗可以看出, Echo聲波納升移液的特性將實驗反應(yīng)體積減小到10-20uL,可以在384孔板或1536孔板進行,復(fù)雜的聯(lián)合實驗檢測以及多達24個點的IC50實驗都可以依賴于Echo的智能軟件輕松完成,大大提高ADME的實驗進程。


 ● 參考文獻:

 Jing Wang , Labcyte Inc.High-throughput Miniaturization of Cytochrome P450 Time-dependent Inhibition Screening Using the Echo? 525 Liquid Handler

Jean Shieh1, Tracy Worzella2, and Aoife Gallagher3 , Miniaturized Luminescent Metabolism Profiling Assays

TRACY WORZELLA, M.S.1, JAMES CALI, PH.D.1, AND NEAL COSBY, PH.D.1, JEAN SHIEH, X.X.2, AOIFE GALLAGHER, X.X.3, GERLINDE ZERZASCHNITZHOFER, X.X.4, AND KIM TITUS, X.X.5, 1PROMEGA CORPORATION, 2LABCYTE CORPORATION, 3DEERAC FLUIDICS, 4TECAN AG CORPORATION, 5CORNING INC. BIOLUMINESCENCE FOR DRUG METABOLISM PROFILING

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