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Biochrom30+氨基酸分析儀氧化水解法檢測(cè)玉米胚芽粕中

Biochrom30+氨基酸分析儀氧化水解法檢測(cè)玉米胚芽粕中
麥奇克/Microtrac  2021-04-02  |  閱讀:1409

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Biochrom30+氨基酸分析儀氧化水解法檢測(cè)玉米胚芽粕中氨基酸

 

 

 

 

 

                                              6.png

 

 

 

 

 

 

 

一、樣品前處理

1、              所用試劑

必須使用重蒸餾水或與之等質(zhì)的水(電導(dǎo)率<10μs)

1、1            雙氧水,30%

1、2            甲酸,98-100%

1、3            苯酚:須重蒸

1、4            偏重亞硫酸鈉

1、5            氫氧化鈉

1、6            鹽酸,ρ=1.18g/ml

1、7            水解劑:6mol/l 的HCL,1L含1g苯酚:

加1g苯酚(3.3)到492mL鹽酸(3.7)中,然后用水定容至1L

1、8            20種氨基酸標(biāo)準(zhǔn)品

行號(hào)

氨基酸

行號(hào)

氨基酸

1

CYS-OX

磺基丙氨酸

2

TAU

?;撬?/p>

3

MET-SO2      

蛋氨酸砜

4

ASP

天冬氨酸

5

THR

蘇氨酸

6

SER      

絲氨酸

7

GLU

谷氨酸

8

PRO      

脯氨酸

9

GLY

甘氨酸

10

ALA       

丙氨酸

11

VAL       

纈氨酸

12

MET

蛋氨酸

13

ILE        

異亮氨酸

14

LEU

亮氨酸

15

NLE       

正亮氨酸

16

TYR

酪氨酸

17

PHE       

苯丙氨酸

18

HIS

組氨酸

19

LYS

賴(lài)氨酸

20

ARG

精氨酸

 

2、              標(biāo)樣配置

   氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:稱(chēng)取上述各氨基酸標(biāo)樣使用PH2.2的Load Buffer配置成2.5umol/L的儲(chǔ)備液備用。

  取氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液與PH2.2的Load Buffer以1:9的比例配置成0.25umol/L的標(biāo)準(zhǔn)液。

3、              前處理設(shè)備

1)        天平

2)        水解管

3)        量筒

4)        無(wú)油真空泵

5)        干浴水解、濃縮儀

6)        移液管

7)        0.45um濾膜

4、                 樣品制備(參考?xì)W盟飼料指令98/64/EC )

1、              樣品的準(zhǔn)備

粉碎樣品,通過(guò)0.5mm的篩孔。高水分的樣品粉碎前必須低于50℃鼓風(fēng)干燥或者冷凍干燥。高脂肪含量的樣品粉碎前必須用輕質(zhì)石油(3.12)脫脂。

2、              氧化

從準(zhǔn)備好的樣品中稱(chēng)取約0.1~1克樣品,準(zhǔn)確到0.2mg,于100 ml帶螺紋蓋子的瓶子中,稱(chēng)取的樣品應(yīng)該含有大約10mg氮,水分不能超過(guò)100mg。將瓶子放于冰水浴中冷卻至0℃,加5ml氧化試劑(過(guò)甲酸苯酚),用帶彎頭的玻璃刮勺混合。用空氣密封膜將瓶子和刮勺一起密封,密封后一起放入0℃冰箱的冰水浴中,放置16小時(shí)。之后,從冰箱中取出,加0.84克偏重亞硫酸鈉(3.4)來(lái)分解過(guò)量的氧化試劑。

3、              水解

 加入25毫升鹽酸-苯酚溶液, 然后將反應(yīng)瓶放在烘箱中,溫度控制在110攝氏度,旋松帽子(防止玻璃瓶子破裂),水解1小時(shí)。然后快速旋緊瓶塞(戴手套和護(hù)眼罩)將其繼續(xù)在烘箱110攝氏度下水解23小時(shí)。

4、              加入內(nèi)標(biāo)并且調(diào)節(jié)pH值到2.20

    當(dāng)水解反應(yīng)結(jié)束后,將反應(yīng)瓶從烘箱中取出,并且打開(kāi)瓶口(戴手套和護(hù)目鏡)。冷卻后用定量加樣器準(zhǔn)確加入15.00克(15毫升)正亮氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,混合并且轉(zhuǎn)移水解溶液到250毫升的塑料燒杯中。加入大約125毫升檸檬酸緩沖液和19毫升氫氧化鈉水溶液,將實(shí)驗(yàn)燒杯放入到樣品容器中用氫氧化鈉水溶液將溶液調(diào)節(jié)到pH為正好2.20。

轉(zhuǎn)移一部分溶液(不需要全部)到50毫升有蓋子的塑料瓶中。可以馬上測(cè)定或者放入冰箱等到分析的時(shí)候測(cè)定。

二、分析方法描述(Biochrom 30+)

氨基酸分析儀分析方法參數(shù):

1)        色譜柱:Biochrom Na型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂柱,4.6′20cm

2)        分離程序:

NO.

Time

Temp

Buffer

Pump

Nin

Rec

Commands

1

01:00

53

3

35.0ml/h

ON

OFF

2

00:00

53

3

35.0ml/h

ON

OFF

Reset

3

03:30

53

3

35.0ml/h

ON

OFF

Load

4

15:45

53

1

35.0ml/h

ON

ON

5

12:00

58

2

35.0ml/h

ON

ON

6

02:00

58

4

35.0ml/h

ON

ON

7

26:00

92

4

35.0ml/h

ON

ON

8

04:00

92

6

35.0ml/h

ON

ON

9

04:00

92

3

35.0ml/h

ON

ON

10

14:00

53

3

40.0ml/h

OFF

OFF

11

02:45

53

3

35.0ml/h

ON

OFF

End

 

3)        運(yùn)行時(shí)間:分析時(shí)間65min

4)        反應(yīng)單元溫度:135°C。

5)        檢測(cè)波長(zhǎng):570nm、440nm同時(shí)檢測(cè)。

三、外標(biāo)法定量

附、玉米胚芽粕分析圖譜

3.png

4.png

5.png

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